轉(zhuǎn)錄因子是一類參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要調(diào)節(jié)因子。不同轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域識別不同基因啟動子區(qū)特定的堿基序列,行使抑制或激活該基因轉(zhuǎn)錄的功能。將目的基因啟動子區(qū)域(通常取轉(zhuǎn)錄起始位點TSS上游-2000bp)、或針對結(jié)合位點進行突變、或分段截斷序列,構(gòu)建到報告基因載體luciferase的上游,共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子過表達質(zhì)粒,通過熒光素酶活反映轉(zhuǎn)錄因子對啟動子活性的調(diào)控作用。
啟動子是基因的一個組成部分,作為基因表達的“開關(guān)”,控制基因表達的起始時間和表達的程度。啟動子本身并不控制基因活動,而是通過與稱為轉(zhuǎn)錄因子的這種具有特殊結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)結(jié)合而控制基因活動的。也就是說啟動子是指能啟動基因轉(zhuǎn)錄的序列,啟動子對基因的表達是必須的,如果一個基因要表達,那么它的前面一定要有一段啟動子序列,RNA聚合酶等蛋白會結(jié)合到啟動子上才能開始基因的轉(zhuǎn)錄。但真核生物基因在無轉(zhuǎn)錄因子時處于不表達狀態(tài),因為RNA聚合酶自身無法啟動基因的轉(zhuǎn)錄,只有當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到其識別的DNA序列上后,基因才開始表達。


常用載體:pGL3-Basic(左) 、pGL3-Promoter(右)
